豬場(chǎng)消毒效果如何，需要通過(guò)洗消程序評(píng)估來(lái)判斷！
一、洗消程序評(píng)估的價(jià)值與難點(diǎn)
西小程序評(píng)估價(jià)值
影響洗消效果的因素
洗消效果評(píng)估難點(diǎn)
洗消程序評(píng)估難點(diǎn)
偽狂犬病與非瘟病毒比較
3.平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)
(1)通過(guò)檢測(cè)篩選陽(yáng)性污染場(chǎng)，檢測(cè)陽(yáng)性后開(kāi)展評(píng)估實(shí)驗(yàn);
(2)將20頭份的偽狂犬疫苗毒(107.5TCID50)稀釋為200毫升;
(3)通過(guò)刷涂和噴霧制備欄舍內(nèi)欄桿、墻面和地面的污染區(qū);
(4)靜止2h干燥(每20頭份的疫苗毒可制備10平米的污染區(qū))
(5)洗消前，用拖布或棉布條對(duì)豬舍相關(guān)區(qū)域進(jìn)行采樣保存;
(6)用對(duì)非瘟有效的消毒劑和洗消程序?qū)ωi舍進(jìn)行全面洗消;
(7)洗消后，用拖布或棉布條對(duì)豬舍相關(guān)區(qū)域進(jìn)行采樣保存;
(8)用熒光定量PCR檢測(cè)方法，分別檢測(cè)偽狂犬疫苗毒和ASFV。
采樣前后比對(duì)
平行試驗(yàn)結(jié)果
二、以病毒感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)的評(píng)估模型的建立
1、毒株和細(xì)胞系選擇：
? PRV分離株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL;PK-15 細(xì)胞系;
? PRRSV疫苗株(R98)：106.5~7.0TCID50/0.1mL;Marc-145細(xì)胞系;
2、實(shí)驗(yàn)基本流程：
病毒與消毒劑混合→感作一定時(shí)間→加入針對(duì)消毒劑的中和劑→按測(cè)定毒價(jià)的方法倍比稀釋?zhuān)臃N細(xì)胞→觀察細(xì)胞病變，與陽(yáng)性對(duì)照比較毒價(jià)變化→通過(guò)PCR確認(rèn)
3、結(jié)果判定：
病毒滅活率=(消毒前病毒滴度-消毒后病毒滴度)/消毒前病毒滴度*100%以病毒滅活率超過(guò)為99.99%以上做為有效的標(biāo)準(zhǔn)。
三、以病毒感染小鼠為基礎(chǔ)的評(píng)估模型的建立
1、毒株和小鼠的選擇：
? PRV分離株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL; 18~22g SPF昆明雌鼠;
2、攻毒模型的建立：
?、賹?/span>49只小鼠平均分為7組(6組做為攻毒組，剩余為陰性對(duì)照)
?、趯?/span>107.6 TCID50/0.1mL的偽狂犬病毒液倍比稀釋為六個(gè)梯度
?、蹖?duì)其中6個(gè)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行攻毒，對(duì)照組注射100uL PBS緩沖液
注：攻毒劑量為100uL，攻毒途徑為腹腔注射
?、苓B續(xù)觀察記錄10天，計(jì)算死亡率并通過(guò)PCR確診死亡原因
小白鼠實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
四、多維度影響因素的評(píng)估方法
最大稀釋濃度：
?消毒劑倍比稀釋后，與病毒液感作時(shí)間30min;
最小作用時(shí)間：
?以適當(dāng)濃度稀釋消毒劑，分別與病毒液感5min，10min，15min，20min，25min，加中和劑終止反應(yīng);
干擾物的影響：
?病毒液先與干擾物混合，再以適當(dāng)濃度稀釋的消毒劑與病毒液感作30min;
?干擾物選擇：
?、僦参镉?/span>(終濃度占比20%);②牛奶(終濃度占比20%) ;③血清(終濃度占比20%);
?還可以針對(duì)水質(zhì)、PH值、溫度等進(jìn)行評(píng)價(jià)(待續(xù))
三、對(duì)消毒劑評(píng)估的階段性結(jié)果
細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果
四、消毒劑應(yīng)用價(jià)值分析和總結(jié)
(審核編輯: 豬豬俠)
